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液相色谱法地榆中金丝桃苷的含量的测定

点选每一次:1288发布期间:2012-05-17
  一、尝试背景
 
  1、目标:成立地榆中金丝桃苷的液相色谱含量测定方式。
 
  2、方式:接纳RP-HPLC测定,C18柱,活动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(46∶54),用三乙胺调pH至3.0,流速1.0ml·min-1,检测波长370nm;供试品溶液的制备接纳甲醇超声提取。
 
  3、成果:测定了差别产地差别批次的地榆药材,金丝桃苷品质分数在0.052%~0.291%。论断该方式活络疾速,精确靠得住,可用于地榆的品质节制。
 
  4、意思:地榆为蔷薇科动物地榆或长叶地榆的枯燥根。其味苦、酸、涩,微寒,具备凉血止血、解毒敛疮之功能。古代药理研讨标明其具备光鲜明显的镇痛感化,首要有用成份为黄酮类化合物,但药典记录品质规范的定量检测方式仅为紫外-可见分光光度法测定其鞣质含量,该法操纵烦琐。金丝桃苷为地榆药材中提取获得的黄酮类化合物。研讨标明,地榆中的金丝桃苷是其止痛感化的有用成份之一。本尝试接纳RP-HPLC法对差别产地中药材市场商品地榆的金丝桃苷成份停止了定量阐发,考查了畅通商品地榆的品质状态,为进一步进步地榆药材的品质节制供给了迷信按照。
 
  二、仪器与试药
 
  1、液相色谱仪,含在线脱气机、四元梯度泵、主动进样器、智能柱温箱、紫外可见光检测器(VWD)、化学任务站。超声波洗濯器。
 
  2、地榆的枯燥根或饮片。尝试中将样品破坏后过100目筛,置枯燥器中备用。
 
  3、金丝桃苷(111521-200303,国药品生物成品检定所,供含量测定用)。甲醇为色谱纯,尝试用水为Milli-Q超纯水。其余试剂均为阐发纯。
 
  三、方式与成果
 
  1、对比品溶液的制备
 
  紧密称取金丝桃苷13.25mg,置量瓶中,加甲醇定容至25ml,其金丝桃苷含量为0.53mg·ml-1。再紧密接收金丝桃苷对比品溶液2.0ml,加甲醇定容至50ml量瓶中,其金丝桃苷含量为0.0212mg·ml-1。
 
  2、供试品溶液的制备
 
  取地榆枯燥药材或饮片的粉末(过100目)1g,别离紧密称定,至具塞锥形瓶中,紧密插手甲醇100ml,称定分量,超声提取1h,放冷,再称定分量,用甲醇补足减失的分量,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,用续滤液作为供试品溶液。
 
  3、色谱前提
 
  HypersilODS2阐发柱(4.6mm×250mm,5μm);活动相甲醇-0.2%磷酸溶液(46:54),用三乙胺调pH至3.0;流速1.0ml·min-1;检测波长370nm;柱温25℃;进样量10μl;在选定的色谱前提下,色谱柱的分手效力(简称柱效)>实际塔板数以金丝桃苷峰计较不低于3000。分手度大于1.5,拖尾因子在0.95~1.05。
 
  4、检测波长的挑选
 
  取金丝桃苷对比品适当,用甲醇消融后作紫外全波长扫描,λ286,370nm,因286nm下非黄酮物资也有接收,为防止搅扰,挑选检测波长为370nm。
 
  5、线性干系的考查
 
  别离紧密接收0.0212mg·ml-1的金丝桃苷对比品溶液2,4,6,8,10,12,16μl注入液相色谱仪,测定基线组成之面积称峰面积。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h>峰面积,以金丝桃苷含量(X)为横坐标,其峰面积接收度积分值(Y)为纵坐标,绘制规范曲线,其回归方程为:Y=2263.9X+2.9635,r=0.9998(n=7),标明金丝桃苷在0.04~0.34μg线性干系杰出。
 
  6、紧密度尝试
 
  紧密接收0.0212mg·ml-1金丝桃苷对比品溶液10μl,持续进样5次,测得峰面积积分值RSD为0.86%,标明紧密度杰出。
 
  7、频频性尝试
 
  紧密称取统一样品粉末1g(5份),按供试品溶液的制备方式制备,进样10μl,测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%,标明该方式的频频性好。
 
  8、不变性尝试统一供试品溶液,从制备终了起头安排,别离于0,2,4,6,8,10h进样检测,其峰面积积分值RSD为1.9%。标明供试品溶液在10h内比拟不变。
 
  9、加样收受接管率尝试
 
  取已知含量的药材(6号含量1.60mg·g-1)样品6份,每份0.50g,紧密称定,计较样品中金丝桃苷量,别离插手适当的金丝桃苷对比品,按样品制备方式和测试前提停止测定,计较加样收受接管率。
 
  10、样品测定
 
  别离紧密接收百般品10μl进样测定,计较含量。
 
  四、尝试成果会商
 
  1、提取前提的挑选
 
  按照金丝桃苷的消融机能,挑选乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂,比拟了3种提取溶剂提取方式(超声、回流及索氏提取)和差别提取时候(0.5,1.0,1.5h)对提取成果的影响。成果显现接纳超声提取方式的提取率zui高,甲醇提取成果,含量成果标明超声提取1.0h可以使待测成份提取完整。尝试证明,含量并未跟着提取时候耽误而有所增添,跨越1h时含量乃至有降落的趋向。
 
  2、活动相的挑选
 
  因为金丝桃苷为黄酮类化合物,本尝试接纳甲醇和0.2%磷酸溶液的二元活动相体系,但尝试中发明拖尾峰(tailingpeak)。前者少见。>色谱峰有拖尾景象。经频频尝试发明,在1000ml的0.2%磷酸溶液中插手1.8ml三乙胺时的分手成果*,经屡次,多批样品测试,体系具备杰出的频频性和不变性,三乙胺能与ODS柱中键合相的剩余硅醇基彼此感化,进步分手度,有助于改良峰形。是以以甲醇-0.2%磷酸溶液(46∶54)用三乙胺调pH至3.0为优,分手成果较好,保留时候适中,且无搅扰[3]。本方式操纵简洁、疾速、频频性好,合用于地榆中金丝桃苷含量的测定。
 
  3、样品阐发
 
  对差别产地地榆中的金丝桃苷含量停止了测定,成果标明,差别产地金丝桃苷的含量存在着必然的差别,有须要对其停止品质节制。
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